【摘 要】簡單描述了醫(yī)院 PCR 實驗室的平面布局及工藝流程；總結(jié)了各規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)與實際使用的需求，提供了PCR實驗室各功能房間的空調(diào)通風(fēng)室內(nèi)設(shè)計參數(shù)；并對各區(qū)域的空調(diào)、通風(fēng)設(shè)計進(jìn)行了詳細(xì)的介紹。

PCR 技術(shù)自 1985 年問世以來，憑其靈敏度高、特異性強、方便快捷、對樣品要求低等優(yōu)點，可測出普通檢驗難以檢測出的病毒，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的疫病診斷。但是，這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規(guī)范的操作為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設(shè)越來越得到重視，因其對檢測結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。

建設(shè) PCR 實驗室首先要有規(guī)范的管理和內(nèi)部質(zhì)量控制流程，其次是分析各醫(yī)院實驗室處理的主要疾病對象，根據(jù)病原的生物危害程度、每天實驗的數(shù)量等，設(shè)置相應(yīng)的通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)。其中要著重考慮實驗中交叉污染的控制、室內(nèi)人員的職業(yè)保護(hù)和排出物對室外環(huán)境的無害化處理。

本文探討了公立醫(yī)院在有限的資源下，采取經(jīng)濟合理的方式，建設(shè)符合國家相關(guān)規(guī)范要求，又具有一定前瞻性，對室內(nèi)的醫(yī)務(wù)人員有所保護(hù)，又不對室外環(huán)境造成污染的 PCR實驗室。供讀者參考。

PCR (Polymerase Chain Reaction) 即聚合酶鏈?zhǔn)椒?/span>應(yīng)，又稱無細(xì)胞分子克隆系統(tǒng)或體外酶促基因擴增法。其基本原理類似于 DNA 的天然復(fù)制過程，是在模板 DNA、引物和 4種脫氧核苷酸存在的條件下，依賴于 DNA 聚合酶的酶促合反應(yīng)，將待擴增的DNA片段與其兩側(cè)互補的寡核苷酸鏈引物經(jīng)“高溫變性——低溫退火——引物延伸”三步反應(yīng)的多次循環(huán)，使 DNA 片段在數(shù)量上呈指數(shù)增加，該技術(shù)可以將極微量的靶DNA 特異地擴增上百萬倍，從而在短時間內(nèi)獲得所需的大量特定基因片段，因此能在臨床上檢測單分子 DNA或每 10 萬個細(xì)胞中僅含 1 個靶 DNA 分子的樣品。

根據(jù)《臨床基因擴增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，臨床基因擴增檢驗實驗室需要設(shè)置試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)等四個區(qū)域。如使用全自動分析儀，區(qū)域設(shè)置可以適當(dāng)合并。

雖然 PCR 實驗室的四個功能分區(qū)是固定的，但各醫(yī)院在實際布置中卻千差萬別，其主要布置形式有分散式和集中式兩種。

分散式：各實驗用房彼此相距較遠(yuǎn)，呈分散布置形式。各實驗之間不易相互干擾。

集中式：完成 PCR 四個實驗過程的實驗用房相鄰布置，形成集中、獨立的實驗區(qū)域。每個實驗室應(yīng)設(shè)置獨立緩沖間、實驗室間應(yīng)設(shè)置帶消毒裝置的傳遞窗。

在理想情況下，PCR 實驗室緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。若房間進(jìn)深允許，可設(shè) PCR 內(nèi)部專用走廊。在減少室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。試劑和標(biāo)本通過機械連鎖傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染，達(dá)到人、物分流。

1. 試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)

該實驗區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

2. 標(biāo)本制備區(qū)

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸 (RNA、DNA) 提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA 的合成。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。

對具有潛在傳染危險性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。 

3. 擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū) 

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA 擴增。此外，已制備的 DNA 模板和合成的 cDNA( 來自樣本制備區(qū) ) 的加入和主反應(yīng)混合液 ( 來自試劑貯存和制備區(qū) ) 制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式 PCR 測定中，通常在第一輪擴增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

手術(shù)室凈化系統(tǒng)。 

        本文部分摘自公眾號（愛德凈化供氧）。